產(chǎn)品說明

SimpleChIP® Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads) #9003 是一套完整的 ChIP 試劑盒，包含進(jìn)行多達(dá) 6 次染色質(zhì)制備和 30 次染色質(zhì)免疫沉淀分析所必需的緩沖液和試劑，優(yōu)化后每次實(shí)驗(yàn)使用 4 X 106 個(gè)細(xì)胞。一次完整的檢測可在短達(dá)兩天內(nèi)進(jìn)行，并且使用更多或更少的細(xì)胞時(shí)可輕松擴(kuò)增或縮減。
細(xì)胞用甲醛固定后裂解，染色質(zhì)與 Micrococcal Nuclease 部分酶切形成片段，從而獲得 1-5 個(gè)核小體的染色質(zhì)片段。染色質(zhì)的酶解較超聲處理更為溫和，可避免因超聲處理期間不同的超聲處理功率和染色質(zhì)乳化而引發(fā)的問題，因?yàn)檫@些因素會因蛋白變性和降解而導(dǎo)致染色質(zhì)碎裂不完全或抗體表位缺失。使用經(jīng) ChIP 驗(yàn)證的抗體和 ChIP-Grade Protein G Magnetic Beads 進(jìn)行染色質(zhì)免疫沉淀。在蛋白質(zhì)-DNA 解交聯(lián)后，DNA 使用 DNA 純化離心柱進(jìn)行純化，以便簡單快速地回收 DNA 并去除蛋白污染物，無需進(jìn)行苯酚/氯仿提取和乙醇沉淀。免疫沉淀期間，特定 DNA 序列的富集可使用標(biāo)準(zhǔn) PCR、定量實(shí)時(shí) PCR、芯片 ChIP 擴(kuò)增、測序或克隆技術(shù)等各種方法進(jìn)行分析。該試劑盒可用于 ChIP-seq。
我們的所有 SimpleChIP®試劑盒還提供確保 ChIP 實(shí)驗(yàn)成功的重要對照物。該試劑盒包含對人和小鼠核糖體蛋白 L30 (RPL30) 基因進(jìn)行 PCR 檢測所需的陽性對照 Histone H3 Antibody、陰性對照 Normal Rabbit IgG Antibody 和引物組。組蛋白 H3 是染色質(zhì)的一種核心組分，能在基因組內(nèi)結(jié)合多數(shù) DNA 序列，包括 RPL30 基因座。由于幾乎所有被檢測基因座上富含Histone H3，因此，Histone H3 Antibody 可用作通用陽性對照。